分析ELISA檢測中為什么會(huì )引發(fā)灰區
點(diǎn)擊次數：673 更新時(shí)間：2019-05-21
ELISA 測定的陽(yáng)性判斷值，通常是將大量陰性和陽(yáng)性人群的測定數據進(jìn)行統計分析后確定的，其確定依據為判斷結果的假陽(yáng)性和假陰性率低。在陽(yáng)性判斷值周?chē)欢ǚ秶鷥戎獾臏y定結果可歸為可疑，亦即ELISA 測定的“灰區”。“灰區”的大小可用統計學(xué)方法確定。測定結果處于“灰區”的樣本，可通過(guò)確認試驗或追蹤檢測來(lái)確定到底是陽(yáng)性還是陰性ELISA“灰區”是把定量分析的正常值范圍引入定性分析而建立的概念。
灰區的設置有二種： （1）CO × （1±C） ，C 為該試劑的批內C （一般在15%～ 20% 間） ；（2）CO ±2S，S 為做室內ROC 的S。
另外，個(gè)人認為： ELISA“灰區”對于不同項目和應用的領(lǐng)域不同，其設置不能一概而論。根據美國疾病控制中心 （CDC） 對美國Ortho 的抗HC 檢測的ELISA 試劑盒進(jìn)行研究，發(fā)現只有檢驗結果S/CO ≥318 時(shí)，高度預示HC 抗體真陽(yáng)性狀態(tài)；若檢驗結果S/CO < 318，存在較高的假陽(yáng)性。在血站系統的獻血員抗HC 篩查用上述兩種灰區的設置方法沒(méi)有什么不可；如果臨床實(shí)驗室抗HC 的灰區也按前者設置，勢必存在較多的假陽(yáng)性。
ELISA 質(zhì)量保證是一個(gè)復雜的過(guò)程，許多重要的環(huán)節都影響到檢測的質(zhì)量?，F分析如下。
1、試劑因素：檢測的原理均基于抗原抗體反應。由于該反應過(guò)程受多種因素的影響，如普遍存在基質(zhì)效應、交叉反應等，因而檢測結果難以溯源，不同方法、不同試劑之間甚至同一試劑不同批號間結果均缺乏可比性。試劑質(zhì)量在很大程度上決定了檢測的水平，因此在引入新項目之前必須對試劑進(jìn)行嚴格的評估。試劑的評估有以下幾個(gè)步驟： （1） 確定開(kāi)展該項目的必要性；
?。?） 了解該項目現有的檢測方法和原理；
?。?） 在了解試劑的組成基礎上選擇多家試劑盒進(jìn)行比較，判斷標準理想參考方法或參考物質(zhì)，其次為臨床的滿(mǎn)意度及機構的報告如各級室間質(zhì)量評價(jià)、CDC 報告等；
?。?） 定期對檢測結果進(jìn)行追蹤反饋直至終認可該試劑。
2、方法學(xué)：ELISA 測定模式包括以下幾種： 雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM 抗體捕捉法、競爭抑制法，其中競爭抑制法因受操作時(shí)差所引起的不公平競爭等因素的影響，結果重復性較差，質(zhì)量較難控制。
3、樣本因素：標本干擾因素包括內源性干擾因素和外源性干擾因素，前者包括類(lèi)風(fēng)濕因子、補體、異嗜性抗體、自身抗體、溶菌酶等，后者包括標本溶血、標本被污染、標本貯存時(shí)間過(guò)長(cháng)、標本凝固不全、冷凍標本的反復凍融等。其中外源性干擾因素是我們在檢測過(guò)程中可以避免也是必須避免的因素，而避免內源性因素的干擾則主要通過(guò)選擇合適的試劑盒，在臨床中遇到少見(jiàn)的疑難病例時(shí)應當考慮到內源性干擾因素的存在。
4、操作因素：ELISA 測定一般遵循以下步驟，包括固相包被→加樣品→溫育→洗滌→加酶結合物→溫育→洗滌→加底物→溫育→顯色→終止顯色→比色。目前各種形式的ELISA 自動(dòng)分析儀已經(jīng)進(jìn)入市場(chǎng)，如廣泛應用于血站系統的微板式全自動(dòng)酶免分析儀，其試劑為開(kāi)放式的，而對于其它類(lèi)型的，則試劑和儀器往往是配套的。但當前大部分醫學(xué)實(shí)驗室均采用手工操作加儀器測定的方式。ELISA 操作步驟復雜，操作不當將引起較大的誤差。
