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上海撫生兔ELISA試劑盒操作及保存方法
每當暑假一到,我都會(huì )很高興.想到有兩個(gè)月的時(shí)間可以不用上課,那簡(jiǎn)直就是一年當中美好的時(shí)光了. 每當暑假一到,我都會(huì )很高興.想到有兩個(gè)月的時(shí)間可以不用上課,那簡(jiǎn)直就是一年當中美好的時(shí)光了. 小編接下來(lái)介紹 兔ELISA試劑盒操作及保存方法。
樣品收集、處理及保存：
1、細胞培養上清：適用于檢測體外培養的細胞分泌性成份。用無(wú)菌管收集細胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
2、細胞：用PBS反復洗滌細胞3次，調整細胞濃度達到104
-106/ml 左右，通過(guò)反復凍融，使細胞破壞并放出細胞內成份，或者細胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。
3、血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。
4、血漿：應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上
清。
5、體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。
6、組織標本：切取組織標本，稱(chēng)取重量0、5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標本勻漿，以2000-3000
rmp離心20 分鐘，收集上清進(jìn)行檢測。
7、樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
8、保存：如果樣品不能立即檢測，應將其分裝，-70 ℃保存，避免反復冷凍。保存過(guò)程中如出現沉淀，應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
兔ELISA試劑盒操作步驟：
1、標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
2、加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7、溫育：操作同3。
8、洗滌：操作同5。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。
10、終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。
11、測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值），測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。
