小鼠丙氨酸氨基轉移酶(ALT)酶聯(lián)免疫試劑盒說(shuō)明

   撫生開(kāi)展的活動(dòng)得到的反饋還不少，本公司試劑在科研界得到了長(cháng)足發(fā)展，除了在其質(zhì)量和價(jià)格上取勝，同時(shí)還堅守完善的售前售后服務(wù)，而這些正是我司的經(jīng)營(yíng)理念和成功經(jīng)驗。在此我們真誠的希望能夠與更多的科研單位獲得長(cháng)期的友情合作!接下來(lái)介紹

小鼠丙氨酸氨基轉移酶(ALT)酶聯(lián)免疫試劑盒說(shuō)明

操作方法：

1. 細胞培養上清：適用于檢測體外培養的細胞分泌性成份。用無(wú)菌管收集細胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

2. 細胞：用PBS反復洗滌細胞3次，調整細胞濃度達到104

-106/ml 左右，通過(guò)反復凍融，使細胞破壞并放出細胞內成份，或者細胞超聲粉碎，離心取上清液檢測。

3. 血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測。

4. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上

清。

5. 體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

6. 組織標本：切取組織標本，稱(chēng)取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標本勻漿，以2000-3000

rmp離心20 分鐘，收集上清進(jìn)行檢測。

7. 樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

8. 保存：如果樣品不能立即檢測，應將其分裝，-70 ℃保存，避免反復冷凍。保存過(guò)程中如出現沉淀，應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

1.標準品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑藴势芬恢?，用?hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時(shí)藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以?xún)冗M(jìn)行。