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有關(guān)PCR反應污染幾個(gè)原因
點(diǎn)擊次數:1190 更新時(shí)間:2021-12-22

PCR反應的最大特點(diǎn)是具有較大擴增能力與*的靈敏性,但令人頭痛的問(wèn)題是易污染,極其微量的污染即可造成假陽(yáng)性的產(chǎn)生。

一、標本間交叉污染

標本污染主要有收集標本的容器被污染,或標本放置時(shí),由于密封不嚴溢于容器外,或容器外粘有標 本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過(guò)程中,由于吸樣槍污染導致標本間污染;有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散,導致彼此間的污染.


二、PCR試劑的污染

主要是由于在PCR試劑配制過(guò)程中,由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染. 


三、PCR擴增產(chǎn)物污染

這是PCR反應中最主要最常見(jiàn)的污染問(wèn)題.因為PCR產(chǎn)物拷貝量大(一般為1013拷貝/ml),遠遠高于   PCR檢測數個(gè)拷貝的極限,所以極微量的PCR產(chǎn)物污染,就可造成假陽(yáng)就可形成假陽(yáng)性.
還有一種容易忽視,最可能造成PCR產(chǎn)物污染的形式是氣溶膠污染;在空氣與液體面摩擦時(shí)就可形成氣溶膠,在操作時(shí)比較劇烈地搖動(dòng)反應管,開(kāi)蓋時(shí)、吸樣時(shí)及污染進(jìn)樣槍的反復吸樣都可形成氣溶膠而污染.據計算一個(gè)氣溶膠顆??珊?8000拷貝,因而由其造成的污染是一個(gè)值得特別重視的問(wèn)題.
  

四、實(shí)驗室中克隆質(zhì)粒的污染

分子生物學(xué)實(shí)驗室及某些用克隆質(zhì)粒做陽(yáng)性對照的檢驗室,這個(gè)問(wèn)題也比較常見(jiàn).因為克隆質(zhì)粒在單位容積內含量相當高,另外在純化過(guò)程中需用較多的用具及試劑,而且在活細胞內的質(zhì)粒,由于活細胞的生長(cháng)繁殖的簡(jiǎn)便性及具有很強的生命力.其污染可能性也很大.

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