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細胞進(jìn)行爬片流程及注意事項
點(diǎn)擊次數:2496 更新時(shí)間:2022-03-01

在做免疫熒光(IF),激光共聚焦(Confocal),凋亡檢測(TUNEL)時(shí),免不了要制備細胞爬片,爬片質(zhì)量*決定了最后拍照的質(zhì)量以及實(shí)驗數據的精準性?,F就如何制備好的細胞爬片介紹。

細胞進(jìn)行爬片操作流程:

1. 胰酶消化細胞后計數重懸細胞于*培養基中(懸浮細胞直接離心)。

2. 加細胞時(shí),根據玻片的大小,先在每個(gè)孔里準備放爬片的位置滴少量培養基,目的是使玻片與培養皿靠培養基的張力粘合到一起,然后放玻片,防止加細胞懸液時(shí)玻片漂起,造成雙層細胞貼片。整個(gè)過(guò)程注意無(wú)菌操作。

3. 根據自己的需要選擇合適的細胞密度種入培養板內即可

保存細胞爬片時(shí),一般用培養皿或避光濕盒,先在皿底放一層面巾紙,然后再放爬片,這樣方便做實(shí)驗時(shí)取片。然后蓋上蓋子,并在蓋子上做標記,為避免混淆。一般-20℃保存2-3月的片子去拍照沒(méi)有問(wèn)題的。


細胞進(jìn)行爬片注意事項:

1. 使用細胞爬片時(shí)(比如在六孔板中放入爬片,六孔板的孔底面積往往會(huì )比爬片面積多出一部分,加細胞懸液時(shí)常常就是細胞鋪滿(mǎn)整個(gè)孔底,有時(shí)細胞生長(cháng)邊集現象,就是靠近壁邊緣密度要高些,這樣處于中央玻片上爬的細胞數量就可能相對較少)。比較好的做法是將玻片放入孔板的孔內后,加細胞懸液時(shí)只滴到玻片上,一直滴到液體布滿(mǎn)整個(gè)玻片又不會(huì )溢出玻片邊緣。

2. 按照實(shí)驗設計,作用一定時(shí)間后取玻片。注意細胞不能太密,否則容易掉片。




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