產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST
解決PCR產(chǎn)物中出現假陰性或無(wú)擴增產(chǎn)物（即陽(yáng)性對照中有條帶，而樣品則無(wú)條帶）方法：
1、條帶放置時(shí)間過(guò)久,核酸被降解，最好在48h內進(jìn)行電泳檢測。
2、DNA模板純度低，如含有雜蛋白質(zhì)或Taq酶抑制劑，可對DNA進(jìn)行再次純化或重新用優(yōu)質(zhì)試劑盒提取DNA; DNA濃度太低時(shí)，可以加大模板量；對具有二級結構DNA使用較好的聚合酶；提取DNA時(shí)，避免吸入酚類(lèi)試劑。
3、對設計不合理的引物進(jìn)行重新設計合成；引物應高濃度小量分裝保存，防止多次凍融而降解失效；檢測引物OD值并進(jìn)行電泳檢測以確保兩條引物濃度一致。
4、酶失活時(shí)，更換新酶，或新舊兩種酶同時(shí)使用，以分析是否因酶的活性喪失或不夠而導致假陰性。
5、PCR反應條件：提高變性/退火溫度；適當增加循環(huán)次數。
6、Mg2+濃度過(guò)低可影響PCR擴增產(chǎn)量甚至使PCR擴增失敗，而Mg2+濃度過(guò)高會(huì )降低PCR的特異性，因而可適當提高M(jìn)g2+濃度。
7、如果靶序列發(fā)生突變或缺失時(shí)，也會(huì )影響引物和模板的特異性結合，產(chǎn)生假陰性結果。
Q3：非特異性條帶擴增或者條帶出現拖尾現象
Answer：
1、當引物特異性差或引物形成二聚體時(shí)，可重新設計引物或者使用巣式PCR
2、若模板或引物濃度過(guò)高，可適當降低模板或引物濃度
3、酶量過(guò)多，則適當減少酶量
4、Mg2+濃度偏高，則降低鎂離子濃度
5、退火溫度偏低，適當提高退火溫度或使用二階段溫度法（94變性，65左右退火與延伸）
6、循環(huán)次數過(guò)多，不僅會(huì )降低擴增效率，且會(huì )使錯誤摻入率增加，因此需要減少循環(huán)次數。
