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IHC常用酶標二抗原理及特點(diǎn)
點(diǎn)擊次數:2002 更新時(shí)間:2022-07-25

免疫組化(IHC)是利用抗原與抗體的特異性結合原理和特殊的標記技術(shù),通過(guò)化學(xué)反應使標記抗體顯色,對組織細胞內的特異性抗原進(jìn)行定位、定性、定量檢測的一門(mén)技術(shù)。本文主要總結二抗原理及其特點(diǎn),以提供更好的選擇。

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                                               IHC常用酶標二抗原理圖

1. SABC法

原理:SABC法是利用鏈酶親和素(Streptavidin)與生物素(Biotin)*的高度親和力這一生物學(xué)性質(zhì),先將生物素與辣根過(guò)氧化物酶(HRP)結合,形成生物素化HRP,然后與鏈酶親和素按一定比例混合,形成SABC復合物。用生物素化二抗與第一抗體結合,再與SABC復合物聯(lián)結形成抗原~抗體~生物素化二抗~ SABC復合物。最后用底物顯色劑顯色。

特點(diǎn):該法具有靈敏度高以及低背景染色等特點(diǎn)。

2. SP法

原理:根據生物素(Biotin) 與鏈霉親和素(Streptavidin)具有強結合力的原理設計。在一抗(兔源與鼠源)與相應的靶抗原結合后,生物素化標記的抗多價(jià)二抗與一抗特異結合;二抗上標記的生物素與標記了辣根過(guò)氧化物酶(HRP)的鏈霉親和素結合,形成抗原~特異性一抗~生物素化的二抗~HRP 標記的鏈霉親和素復合物。

特點(diǎn):該法孵育時(shí)間短(通常為10min),靈敏度高以及低背景染色等特點(diǎn)。

3. Polymer酶標二抗法

原理:該法采用一段多聚氨基酸聚合物做為載體鏈,將該多聚物與二抗結合,然后可再標記上多個(gè)HRP/AP酶分子,所以同樣具有很高的信號放大作用。

特點(diǎn):靈敏度高;操作步驟簡(jiǎn)單;無(wú)需進(jìn)行內源性的生物素封閉。

4. 直接酶標二抗法

該法是將HRP/AP酶分子直接標記于二抗上。因此需要普通的酶標二抗即可完成。實(shí)驗簡(jiǎn)單,成本低,但是因為沒(méi)有信號放大作用,所以對很多表達豐度不是很高的抗原就可能檢測不到。


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