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細胞遷移即細胞劃痕法,是測定細胞遷移運動(dòng)與修復能力的方法,類(lèi)似體外傷口愈合模型。在體外培養皿或平板培養的單層貼壁細胞上,用微量槍頭或其他硬物在細胞生長(cháng)的中央區域劃線(xiàn),去除中央部分的細胞,然后繼續培養細胞至實(shí)驗設定的時(shí)間,取出細胞培養板,觀(guān)察周邊細胞是否生長(cháng)至中央劃痕區,以此判斷細胞的生長(cháng)遷移能力,實(shí)驗通常需設定正常對照組和實(shí)驗組,實(shí)驗組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等組別,通過(guò)不同分組之間的細胞對于劃痕區的修復能力,可以判斷各組細胞的遷移與修復能力。
當細胞長(cháng)到融合成單層狀態(tài)時(shí),在融合的單層細胞上人為一個(gè)空白區域,稱(chēng)為“劃痕"。劃痕邊緣的細胞會(huì )逐漸進(jìn)入空白區域使“劃痕"愈合。
實(shí)驗方法:
1、培養板接種細胞之前先用marker筆在12孔板背面畫(huà)橫線(xiàn)標記(方便拍照時(shí)定位同一個(gè)視野)。
2、細胞消化后接入12孔板,數量以貼壁后鋪滿(mǎn)板底為宜(數量少時(shí)可培養一段時(shí)間至鋪滿(mǎn)板底)。
3、細胞鋪滿(mǎn)板底后,用1ml槍頭垂直于孔板細胞劃痕,盡量保證各個(gè)劃痕寬度一致。(人工槍頭劃痕難以保證劃痕寬度的一致性,影響實(shí)驗結果,這也是該方法最大的缺陷)。
4、吸去細胞培養液,用PBS沖洗孔板三次,洗去劃痕產(chǎn)生的細胞碎片。
5、加入無(wú)血清培養基,拍照記錄。
6、將培養板放入培養箱培養,每隔4-6小時(shí)取出拍照。
7、根據收集圖片數據分析實(shí)驗結果。