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實(shí)時(shí)熒光定量PCR與普通PCR二者的實(shí)驗結果相同,都能說(shuō)明生物體外的特殊DNA復制的整個(gè)過(guò)程的擴增效率和溶解溫度情況。但是二者也有以下不同之處。
1、二者系統組成不同
熒光定量PCR儀比普通的PCR儀多了熒光信號采集系統和計算機分析處理系統。
2、二者原理不同
熒光定量PCR實(shí)時(shí)監測與DNA結合的熒光染料激發(fā)的熒光,普通OCR通過(guò)檢測插入DNA中核算染料的量來(lái)測定PCR最終產(chǎn)物量。
3、二者反應要求不同
熒光定量PCR對擴增片段有較高的要求,一般為100-300bp,普通PCR可以擴增長(cháng)點(diǎn)的片段。
4、二者應用不同
熒光定量PCR主要是用來(lái)定量分析和確定基因轉錄水平的,普通的PCR儀是做定性分析和擴增基因片段,定量PCR儀可以做普通PCR儀的工作,反之不行。
5、二者測量成本不同
定量PCR儀價(jià)格較為昂貴,普通的基因擴增儀(PCR儀)只能夠定性地分析是否存在目標片段。但是價(jià)格要低很多,而且運行成本也要低很多。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統定量只能終點(diǎn)檢測的局限,實(shí)現了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過(guò)對每個(gè)樣品Ct值的計算,根據標準曲線(xiàn)獲得定量結果。