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腫瘤血管生長(cháng)因子試劑盒elisa說(shuō)明書(shū)

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腫瘤血管生長(cháng)因子試劑盒elisa說(shuō)明書(shū)

特點(diǎn):

一、高效、靈敏、特異的抗體;

二、穩定的重復性和可靠性;

三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;

四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類(lèi)型;

試驗原理:
ES試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(ELISA).已知ES濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進(jìn)行檢測。先將ES和生物素標記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中ES的濃度呈比例關(guān)系。

操作步驟:
1. 使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個(gè)標準品和空白孔建議做復孔。每個(gè)樣品根據自己的數量來(lái)定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時(shí)。
4. 甩去孔內液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6. 甩去孔內液體,每孔加滿(mǎn)洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8. 取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
9. 在450nm波長(cháng)處測定各孔的OD值。

4、敏感度: 0.1 pg/ml。

結果判斷與分析:
1、儀器值:于波長(cháng)450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值

2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的ES標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線(xiàn),樣品的ES含量可根據其OD值由標準曲線(xiàn)換算出相應的濃度。

3、檢測值范圍:0-240pg/ml

操作注意事項:
1. 試劑應按標簽說(shuō)明書(shū)儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過(guò)后的標準品應丟棄,不可保存。
2. 實(shí)驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
3. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6. 洗滌酶標板時(shí)應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7. 底物A應揮發(fā),避免長(cháng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對光敏感,避免長(cháng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗完成后應立即讀取OD值。
8. 加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時(shí)間一樣。
9. 按照說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

 

 


 
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