檢測試劑盒為何會(huì )出現錯誤的實(shí)驗結果
點(diǎn)擊次數：618 更新時(shí)間：2019-04-23
檢測試劑盒為何會(huì )出現錯誤的實(shí)驗結果
檢測試劑盒以免疫學(xué)反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來(lái)的一種高敏感性的試驗技術(shù)。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。
應用雙抗體夾心法測定標本水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入，再與HRP標記的抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。
檢測試劑盒TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長(cháng)下測定吸光度，通過(guò)標準曲線(xiàn)計算樣品的濃度。
檢測試劑盒分為內源性物質(zhì)和外源性物質(zhì)兩種：
1．內源性物質(zhì)
普遍認為大約40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質(zhì)，可以不同程度影響檢測結果。常見(jiàn)的干擾物質(zhì)有：補體、嗜異性抗體等。
?。?）補體
檢測試劑盒中固相一抗和標記二抗過(guò)程中，抗體分子發(fā)生變構，其FC段的補體C1q分子結合位點(diǎn)被暴露出來(lái)，使C1q 可以將二者連接起來(lái)，從而造成假陽(yáng)性。解決的辦法是：①用EDTA稀釋標本；②用53℃，10 min或56℃，30 min加熱血清使C1q滅活。
?。?）嗜異性抗體
人類(lèi)血清中含有能與嚙齒類(lèi)動(dòng)物（如鼠等）Ig （s） 結合的天然嗜異性抗體，可將ELISA系統中一抗和二抗連接起來(lái)，也能造成假陽(yáng)性。解決的辦法是：可在標本稀釋液中加入過(guò)量的動(dòng)物Ig （s） ，但加入量不足或亞類(lèi)不同時(shí)無(wú)效。
2．外源性物質(zhì)
外源性物質(zhì)常常是由于用于檢測試劑盒的血標本的采集、貯存不當等原因所致。如標本溶血、標本被細菌污染等。
?。?）標本溶血
由于各種人為原因引起的標本溶血，均可因紅細胞破壞溶解時(shí)釋放出大量具有過(guò)氧化物酶活性的血紅蛋白，在以辣根過(guò)氧化物酶為標記的ELISA測定中，會(huì )導致非特異性顯色，干擾測定結果。為克服上述干擾，標本采集時(shí)必須注意避免溶血。
?。?）標本受細菌污染
因菌體中可能含有內源性辣根過(guò)氧化物酶，因此，被細菌污染的標本和溶血標本一樣，可產(chǎn)生非特異性顯色干擾測定結果。
