一文輕松學(xué)會(huì )如何使用RT-PCR試劑盒
點(diǎn)擊次數：5757 更新時(shí)間：2020-04-03
RT-PCR試劑盒是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實(shí)驗診斷方法，由于其試劑穩定，易保存，操作簡(jiǎn)便，結果判斷較客觀(guān)等因素，已廣泛應用在免疫學(xué)檢。
下面小編要為大家介紹的是RT-PCR試劑盒詳細操作規程：
1、使用前請先將試劑盒在室溫下平衡半小時(shí)。
2、空白孔不加樣，只加顯色劑A，B和終止液用于調零。
3、標準品孔：每孔加入稀釋好的標準品50μl，零孔加入標準品/樣品稀釋液50μl，然后加入生物素抗原工作液50μl(零孔必須要做，并將其作為標曲的后一個(gè)點(diǎn))。
4、樣品孔：加入樣品50μl，然后加入生物素抗原工作液50μl。
5、輕輕搖晃，蓋上封板膜，37℃培養箱中孵育30min。
6、將25倍濃縮洗滌液用蒸餾水25倍稀釋后備用。
7、次洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
8、加入50μl親和素-HRP到標準品孔和樣品孔中，輕輕搖晃，蓋上封板膜，37℃培養箱中孵育30min。
9、第二次洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
10、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。
11、終止：每孔加終止液50μl，終止反應。
12、測定：以空白孔調零，450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度，測定應在加終止液后10分鐘以?xún)冗M(jìn)行。
13、計算：ADP試劑盒；RT-PCR試劑盒根據濃度和OD值算出標準曲線(xiàn)的回歸方程，建議用計算軟件進(jìn)行計算，推薦使用ELISAcalc進(jìn)行計算，擬合模型選用logistic曲線(xiàn)。
