通用PCR試劑盒的質(zhì)量?jì)?yōu)劣辨別介紹
點(diǎn)擊次數：560 更新時(shí)間：2020-06-18
通用PCR試劑盒是通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附反應進(jìn)行實(shí)驗來(lái)檢測特定物質(zhì)的試劑盒，試劑盒中會(huì )有不同濃度的標準樣品，在酶標條中通過(guò)固相的抗原或抗體，酶標記的抗原或抗體，酶作用的底物反應可形成標準曲線(xiàn)，從而進(jìn)行試驗樣品的測定。
今天小編要為您介紹的是辨別通用PCR試劑盒優(yōu)劣的方法：
1. 選定一個(gè)檢測范圍內的濃度做多孔重復，可看出平行性好不好。即板內CV值的大小，此操作時(shí)需要小心加樣的準確性。對一些制作較粗糙的試劑盒來(lái)說(shuō)，板間CV值是較大的。
2. 可采用已知濃度的重組細胞因子，稀釋到檢測范圍內作為樣本加入，看檢測的準確性。
3. 對用待測指標的重組細胞因子做試劑盒說(shuō)明書(shū)上標定的zui小濃度稀釋?zhuān)蓽y出靈敏度，建議5個(gè)復孔以上才有意義。一般以20個(gè)復孔做出的結果作為檢測限。用此實(shí)驗可驗證出所購試劑盒的靈敏度是否如說(shuō)明書(shū)所述，也可判斷出所購試劑盒是否有夸大之說(shuō)。
4. 如果有相同指標的通用PCR試劑盒，可用對方的標準品作為樣本，分別加入各自的試劑盒做檢測，以檢測試劑盒的真實(shí)性，準確性。如其中一種是的，比較可靠的話(huà)，可作為標準來(lái)驗證另一試劑盒的準確程度。
在進(jìn)行通用PCR試劑盒實(shí)驗時(shí)，各項條件的選擇也是非常重要的：
1、包被抗體的選擇：將抗體吸附在固相載體表面的時(shí)候，一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度，進(jìn)行包被后，當其它試驗條件大致一樣的情況下，觀(guān)察陽(yáng)性標本的OD值。選擇蛋白量少，OD值大的濃度。
2、固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚苯乙烯、纖維素等。其形式可以是凹孔平板、珠粒等。目前常用的是四十孔的聚苯乙烯凹孔板。不論使用哪一種載體，在使用前進(jìn)行篩選：在同一實(shí)驗條件下進(jìn)行反應，觀(guān)察其顯色反應的均一性如何，以此來(lái)判斷其吸附性能是否良好。
