染料法PCR試劑盒所使用的樣本應滿(mǎn)足以下要求
點(diǎn)擊次數：506 更新時(shí)間：2022-01-10
染料法PCR試劑盒利用離心柱內硅基質(zhì)膜提取豬偽狂犬病毒DNA，以此為模板，在特異引物和TaqDNA聚合酶的作用下，經(jīng)高溫變性，低溫退火、中溫延伸的循環(huán)，使特異的DNA的片段拷貝數放大一倍。經(jīng)過(guò)30次循環(huán)，使擴增的DNA的片段放大數百萬(wàn)倍。將擴增的DNA的片段進(jìn)行電泳，經(jīng)染色后在紫外燈照射下，肉眼可見(jiàn)DNA的片段的擴增帶，進(jìn)而判斷待檢樣本中是否含有豬偽狂犬病毒。
染料法PCR試劑盒所使用的樣本應滿(mǎn)足以下要求：
1、血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過(guò)程中如出現沉淀，應再次離心。
2、血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3、尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。
4、細胞培養上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應再次離心。
5、組織標本：切割標本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6、標本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻進(jìn)行，提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7、不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
