RT-PCR試劑盒的兩種檢測模式介紹
點(diǎn)擊次數：452 更新時(shí)間：2022-12-01
RT-PCR試劑盒具有敏感性高、特異性強、快速等特點(diǎn)，目前廣泛應用于農獸藥、真菌殘留檢測，該方法從加樣、洗板、顯色到讀數步驟繁多，其中任何一步控制不好都可能影響檢測結果的準確性。
今天要為大家介紹的是RT-PCR試劑盒的兩種檢測模式：
1、雙雜交探針模式(FRET)：FRET探針又稱(chēng)雙雜交探針，FRET探針由兩條相鄰探針組成，在一條探針端標記FAM熒光基團，另一探針端標記Red640熒光基團。當復性時(shí)，探針結合在模板上，FAM基團和Red640基團相鄰，激發(fā)FAM產(chǎn)生的熒光，作為Red640基團的激發(fā)光被吸收，使Red640發(fā)出波長(cháng)為640的熒光。當變性時(shí)，探針游離，兩基團距離遠，不能產(chǎn)生640波長(cháng)的熒光。由于FRET探針是靠近發(fā)光，所以檢測信號是實(shí)時(shí)信號，非累積信號。
2、交探針模式(Beacon)：分子信標是一種呈發(fā)夾結構的莖環(huán)寡核苷酸探針，兩端的核酸序列互補配對，因此標記在一端的熒光基團與標記在另一端的淬滅基團緊緊靠近。熒光基團被激發(fā)后產(chǎn)生的光子被淬滅劑淬滅，由熒光基團產(chǎn)生的能量以紅外而不是可見(jiàn)光形式釋放出來(lái)。分子信標的莖環(huán)結構中，環(huán)一般為15-30個(gè)核苷酸長(cháng)，并與目標序列互補；莖一般5-7個(gè)核苷酸長(cháng)，并相互配對形成莖的結構。熒光基團標記在探針的一端，而淬滅劑則標記在另一端。在復性溫度下，因為模板不存在時(shí)形成莖環(huán)結構，當加熱變性會(huì )互補配對的莖環(huán)雙鏈解開(kāi)，如果有模板存在環(huán)序列將與模板配對。與模板配對后，分子信標將成鏈狀而非發(fā)夾狀，使得熒光基團與淬滅劑分開(kāi)。當熒光基團被激發(fā)時(shí)，因淬滅作用被解除，發(fā)出激發(fā)光子。由于是酶切作用的存在，分子信標也是積累熒光。
