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白色念珠菌PCR檢測試劑盒技術(shù)概論
聚合酶鏈反應是80年代中期發(fā)展起來(lái)的體外核酸擴增技術(shù)。它具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡(jiǎn)便、重復性好、易自動(dòng)化等突出優(yōu)點(diǎn)；能在一個(gè)試管內將所要研究的目的基因或某一DNA片段于數小時(shí)內擴增至十萬(wàn)乃至百萬(wàn)倍,使肉眼能直接觀(guān)察和判斷；可從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個(gè)細胞中擴增出足量的DNA供分析研究和檢測鑒定。過(guò)去幾天幾星期才能做到的事情，用PCR幾小時(shí)便可完成。PCR技術(shù)是生物醫學(xué)領(lǐng)域中的一項革命性創(chuàng )舉和里程碑。
PCR反應體系與反應條件
標準的PCR反應體系：
10×擴增緩沖液 10ul
4種dNTP混合物 各200umol/L
引物 各10～100pmol
模板DNA 0.1～2ug
Taq DNA聚合酶 2.5u
Mg2+ 1.5mmol/L
加雙或三蒸水至 100ul
白色念珠菌PCR檢測試劑盒PCR反應五要素： 參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物： 引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。
設計引物應遵循以下原則：
①引物長(cháng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長(cháng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過(guò)多易出現非特異條帶。ATGC好隨機分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3’端的互補，否則會(huì )形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3’端的堿基，特別是zui末及倒數第二個(gè)堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)，被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點(diǎn)，這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無(wú)明顯同源性。
白色念珠菌PCR進(jìn)口試劑盒圖片特點(diǎn)優(yōu)勢：
1. 特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實(shí)現對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到100%。
2. 重現性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗菌株的驗證，重現性為100%。
3. 靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現對其的直接檢測，無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4. 實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實(shí)現對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個(gè)檢測過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過(guò)程中不會(huì )出現任何的假陽(yáng)性及假陰性報告結果。
