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實(shí)驗原理:
傳代培養是組織培養常規保種方法之一。也是幾乎所有細胞生物學(xué)實(shí)驗的基礎。當細胞在培養瓶中長(cháng)滿(mǎn)后就需要將其稀釋分種成多瓶，細胞才能繼續生長(cháng)。這一過(guò)程就叫傳代。傳代培養可獲得大量細胞供實(shí)驗所需。傳代要在嚴格的無(wú)菌條件下進(jìn)行，每一步都需要認真仔細的無(wú)菌操作。
傳代培養實(shí)驗操作步驟:
1.入無(wú)菌室之前用肥皂洗手，用75%酒精擦拭消毒雙手。
2.倒置顯微鏡下觀(guān)察細胞形態(tài)，確定細胞是否需要傳代及細胞需要稀釋的倍數。將培養用液置37℃下預熱。
3.超凈臺臺面應整潔，用0.1%新潔爾滅溶液擦凈。
4.打開(kāi)超凈臺的紫外燈照射臺面20min左右，關(guān)閉超凈臺的紫外燈，打開(kāi)抽風(fēng)機清潔空氣，除去臭氧。
5.點(diǎn)燃酒精燈;取出無(wú)菌試管，巴斯德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過(guò)酒精燈火焰略燒后插在無(wú)菌試管內。
6.將培養用液瓶口用75%酒精消毒，過(guò)酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上。
7.倒掉培養細胞的舊培養基。酌情可用2-3mLHanks液洗去殘留的舊培養基，或用少量胰酶涮洗一下。
8.每個(gè)大培養瓶加入1mL胰酶，小瓶用量酌減，蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀(guān)察，當細胞收回突起變圓時(shí)立即翻轉培養瓶，使細胞脫離胰酶，然后將胰酶倒掉。注意勿使細胞提早脫落入消化液中。
9.加入少量的含血清的新鮮培養基，反復吹打消化好的細胞使其脫壁并分散，再根據分傳瓶數補加一定量的含血清的新鮮培養基(7~10mL/大瓶，3~5mL/小瓶)制成細胞懸液，然后分裝到新培養瓶中。蓋上瓶蓋，適度擰緊后再稍回轉，以利于CO?氣體的進(jìn)入，將培養瓶放回CO?培養箱。
10.對懸浮培養細胞，步驟7-9不做?？蓪⒓毎麘乙哼M(jìn)行離心去除舊培養基上清，加入新鮮培養基，然后分裝到各瓶中。
