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ELISA檢測結果可以定量、定性或半定量地解釋。在定量檢測中,使用已知標準的連續稀釋液來(lái)生成標準曲線(xiàn),通常是光密度(OD)與濃度的關(guān)系。由此,可以計算出未知樣品中目標物的精確數量。
標準曲線(xiàn)計算和ELISA實(shí)驗中未知物目標濃度測定示例
在定性檢測中,通常仍會(huì )通過(guò)使用酶標儀來(lái)收集數據,但結果將通過(guò)與沒(méi)有標準曲線(xiàn)的空白和/或陰性孔的比較來(lái)解釋為陽(yáng)性或陰性。
半定量檢測也是在不使用連續稀釋或標準曲線(xiàn)的情況下收集數據。然而,包含陰性和陽(yáng)性標準,通常是高陽(yáng)性和低陽(yáng)性,有利于相對比較未知樣本井和已知狀態(tài)的樣本孔之間的水平。
通過(guò)使用這些標準來(lái)監測檢測的可重復性,可以設定一個(gè)臨界值,超過(guò)臨界值的結果確定為陽(yáng)性,低于臨界值的為陰性。一些檢測方法可能還包括一個(gè)“灰區"。對于數值落在這個(gè)區域的樣品,建議重新測試或進(jìn)一步調查。
雖然定量檢測在某些情況下可能是可取的,但在每塊板上包含一條完整的標準曲線(xiàn)會(huì )占用寶貴的孔位。因此,根據用戶(hù)希望從檢測結果中獲得的信息,存在一種權衡。
像許多檢測方法一樣,從ELISA獲得的結果很少可能是100%準確的,假陽(yáng)性和假陰性結果都有可能。因此,大多數測試將與靈敏度和特異性相關(guān);它們越接近100%,測試就越好。
有許多因素會(huì )影響這些值,例如:
1、非特異性結合或交叉反應的高背景;
2、抗體對其目標親和力差;
3、非最佳檢測條件;
4、樣本條件和復雜性。
因此,計算靈敏度和特異性的數值是許多ELISA檢測方法發(fā)展的一個(gè)重要步驟,特別是在診斷環(huán)境中,以確定獲得的任何結果的信息量和可靠性。