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ELISA測定標本需要考慮方面
點(diǎn)擊次數:439 更新時(shí)間:2023-10-30

      用于ELISA測定的標本最為常用的是血清(漿),有時(shí)因為特定的檢測目的,也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標本。目前使用血清標本測定的標志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物、激素、特種蛋白、細胞因子和治療藥物等。對用于激素和治療藥物測定的血清標本的收集,要注意收集時(shí)間甚或體位有可能會(huì )對測定結果產(chǎn)生影響。如可的松在早晨4~6點(diǎn)之間,會(huì )有一峰值出現:生長(cháng)激素、促黃體激素(LH)和促卵泡激素(FSH)均以陣發(fā)性方式釋放,因此,在測定此類(lèi)激素時(shí),有必要在密切相連的時(shí)間間隔內采取數份血樣本,以其中間值為測定值。又如當從臥位變?yōu)檎玖⑽粫r(shí),血清中腎素活性將出現明顯增高。再如治療藥物的檢測,應根據藥代動(dòng)力學(xué)選擇服藥后的最適時(shí)間抽血檢測。用于傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標志物和特種蛋白等的檢測的血清標本的收集則沒(méi)有時(shí)間和體位方面的影響,只是在處理和保存方面要考慮以下幾個(gè)方面:

1、要注意避免出現嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類(lèi)似過(guò)氧化物的活性,因此,在以HRP為標記酶的ELISA測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應顯色。

2、樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,一則細菌的生長(cháng),其所分泌的一些酶可能會(huì )對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì )對用相應酶作標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾。

3、血清標本如是以無(wú)菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長(cháng)時(shí)間保存,應在-70℃以下。

4、冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結果。此外,凍融標本的混勻亦應注意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,反復顛倒混勻即可。

5、標本在保存中如出現細菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí),應離心沉淀后取上清檢測。


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